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    ELISA試劑盒的應(yīng)用與操作步驟

    發(fā)布時間: 2013-10-28  點擊次數(shù): 1068次

    ELISA試劑盒的應(yīng)用:

      1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。

      2、研究抗酶抗體的合成。

      3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

      4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。


    ELISA試劑盒的操作步驟:

      一、雙抗體夾心法

      1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

      2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

      3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

      4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

      5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

      6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

      二、間接法

      1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;

      2.次日洗滌3次;

      3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

      4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

      5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

      6.’zui后一遍用DDW洗滌。

      其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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      ELISA試劑盒:ELISA試劑盒,ELISA檢測試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,雞、鴨、猴、兔的ELISA試劑盒。

      進口培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,大腸桿菌O157培養(yǎng)基,細菌總數(shù)培養(yǎng)基,弧菌檢驗培養(yǎng)基,李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基。

      血清:胎牛血清,人血清,動物血清。

      生物試劑:Amresco,Sigma,Spectrum進口試劑。

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