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    ELISA試劑盒的必要條件

    發(fā)布時(shí)間: 2017-12-25  點(diǎn)擊次數(shù): 1218次

    一.ELISA試劑盒的試劑,超卓的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)效果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異,國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)查驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘說(shuō)板式ELISA各個(gè)操作進(jìn)程的留心要害,珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特別儀器協(xié)作運(yùn)用,嚴(yán)峻遵照規(guī)矩操作,必能得出準(zhǔn)確的效果。 
     
    二.可用作ELISA試劑盒的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其間某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均對(duì)等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。除特別狀況外,在醫(yī)學(xué)查驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可對(duì)等運(yùn)用。
     
    三. ELISA試劑盒血清標(biāo)本可按常規(guī)辦法搜集,應(yīng)留心避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)添加非特異性顯色。  
     
    四.血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)發(fā)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其間的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。 
     
    五.一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,逾越一周測(cè)定的需低溫冰存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上劇烈振動(dòng)。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。重復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)下跌,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測(cè),宜少數(shù)分裝冰存。保存血清自搜集時(shí)就應(yīng)留心無(wú)菌操作,也可參與恰當(dāng)防腐劑。  
     
    六.按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求預(yù)備試驗(yàn)中需用的試劑。ELISA試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液運(yùn)用pH計(jì)丈量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
     
    七.在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不可濺起,不可發(fā)生氣泡。
     
    八.ELISA試劑盒加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)矩的量參與板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以發(fā)生穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按規(guī)矩的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標(biāo)本,然后在微型顫抖器上顫抖1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物運(yùn)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程靈敏結(jié)束

     

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