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    豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)Elisa試劑盒使用說明書

    發(fā)布時間: 2016/8/9  點擊次數(shù): 783次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    使用目的:
    本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中4-羥基壬烯酸(4-HNE)含量。
    豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)Elisa試劑盒使用說明書實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)水平。用純化的豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入4-羥基壬烯酸(4-HNE),再與HRP 標記的4-羥基壬烯酸(4-HNE)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的4-羥基壬烯酸(4-HNE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)濃度。
    試劑盒組成
    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(40ng/L) 0.5ml×1 瓶
    3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
    6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)Elisa試劑盒使用說明書操作步驟
    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    20ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
    10ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
    5ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
    2.5ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
    1.25ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
    4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同3。
    8. 洗滌:操作同5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
    計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    豬4-羥基壬烯酸(4-HNE)Elisa試劑盒使用說明書保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個月

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