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    小鼠羥基類固醇脫氫酶酶聯(lián)免疫分析檢測方法說明

    發(fā)布時間: 2016/8/4  點擊次數(shù): 1180次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    使用目的:
    本試劑盒用于測定小鼠血清樣本3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)含量。
    小鼠羥基類固醇脫氫酶酶聯(lián)免疫分析檢測方法說明實驗原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)水平。用純化的小鼠3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD),再與HRP標記的3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠3β-羥基類固醇脫氫酶(3βHSD)濃度。
    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    60ng/L
    5號標準品
    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
    30ng/L
    4號標準品
    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
    15ng/L
    3號標準品
    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
    7.5ng/L
    2號標準品
    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
    3.75ng/L
    1號標準品
    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    溫育:操作同3。
    洗滌:操作同5。
    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
    測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
    小鼠羥基類固醇脫氫酶酶聯(lián)免疫分析檢測方法說明操作程序總結(jié): 
    計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    小鼠羥基類固醇脫氫酶酶聯(lián)免疫分析檢測方法說明保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月

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