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    植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析

    發(fā)布時間: 2014/12/17  點擊次數(shù): 687次
    提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析使用目的:本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關(guān)樣本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量。
    實驗原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用純化的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入苯丙氨酸解氨酶(PAL),再與HRP標記的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)濃度。 
    植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析標本要求 
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析操作步驟
    1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
    7.溫育:操作同3。
    8.洗滌:操作同5。
    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
    11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
    計算
      以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

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