ELISA試劑盒試驗(yàn)3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此計(jì)劃，則棄去，算了另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭核算NCX；
如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上計(jì)劃，則該次試驗(yàn)無效。
在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。
現(xiàn)舉某種檢查 HBsAg的試劑盒為例。
先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對(duì)照（P）、和陰性對(duì)照（N）的吸光值，然后進(jìn)行核算。
核算方法有多種，大致可分為陽性斷定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。
陽性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。
ELISA試劑盒陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對(duì)許多標(biāo)本的試驗(yàn)檢查而得到的。ELISA試劑盒陽性斷定值（cut-off value）一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為區(qū)別作用陽性或陰性的規(guī)范。
用此法區(qū)別作用央求試驗(yàn)條件非常穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴(yán)重按規(guī)則操作。
ELISA試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。
測得A值后，先核算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有用。